GB 4789.2-2022 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 

中华人民共和国国家标准

GB 4789.2—2022

食品安全国家标准

食品微生物学检验   菌落总数测定

 

2022-06-30 发布                                                                                     2022-12-30 实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会

国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发布

 

前  言

本标准代替GB 4789.2—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。

本标准与GB 4789.2—2016相比，主要变化如下：

—增加了附录B;

—修改了设备和材料；

—修改了培养基和试剂；

—修改了检验程序；

—修改了操作步骤；

—修改了附录A。

 

1     范围

本标准规定了食品中菌落总数(Aerobic plate count)的测定方法。

本标准适用于食品中菌落总数的测定。

2    术语和定义

2.1

菌落总数aerobicplatecount

食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g(mL)检样

中形成的微生物菌落总数。

3    设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a)恒温培养箱：36℃±1℃,30℃±1℃。

b)冰箱：2℃~5℃。

c)恒温装置：48℃±2℃。

d)天平：感量为0.1 g。

e)均质器。

f)振荡器。

g)无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。

h)无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。

i)无菌培养皿：直径90 mm。

j)pH计或pH比色管或精密pH试纸。

k)放大镜或／和菌落计数器。

4    培养基和试剂

4.1     平板计数琼脂培养基：见A.1。

4.2   菌落总数测试片：应符合GB 4789.28中平板计数琼脂培养基质量控制要求，且主要营养成分与平板计数琼脂培养基配方一致。

4.3    无菌磷酸盐缓冲液：见A.2。

4.4    无菌生理盐水：见A.3。

5    检验程序

菌落总数的检验程序见图 1 。

图 1     菌落总数的检验程序

6    操作步骤

6.1     样品的稀释

6.1.1   固体和半固体样品：称取25 g样品置于盛有225 mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内，8 000 r/min~10 000 r/min均质1 min~2 min,或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min,制成1∶10的样品匀液。

6.1.2   液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置于盛有225 mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min,制成1∶10的样品匀液。当结果要求为每g样品中菌落总数时，按6.1.1操作。

6.1.3   用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），在振荡器上振荡混匀，制成1∶100的样品匀液。

6.1.4   按6.1.3操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。

6.1.5    根据对样品污染状况的估计，选择1个~3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取1 mL样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。

6.1.6  及时将15 mL~20 mL冷却至46℃~50℃的平板计数琼脂培养基（可放置于48℃±2℃恒温装置中保温）倾注培养皿，并转动培养皿使其混合均匀。

6.2     培养

6.2.1  水平放置待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48 h±2 h。水产品30℃±1℃培养72 h±3 h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面蔓延生长的菌落，可在凝固后的琼脂培养基表面覆盖一薄层平板计数琼脂培养基（约4 mL),凝固后翻转平板，进行培养。

6.2.2    如使用菌落总数测试片，应按照测试片所提供的相关技术规程操作。

6.3    菌落计数

6.3.1    可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。 菌落计数以菌落形成单位(colony forming unit, CFU)表示。

6.3.2    选取菌落数在 30 CFU~300  CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU 的可记录为多不可计。

6.3.3    其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无较大片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，可计算半个平板后乘以 2,代表一个平板菌落数。

6.3.4    当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

7    结果与报告

7.1     菌落总数的计算方法

7.1.1    若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(mL)样品中菌落总数结果，示例见B.1。

7.1.2   若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算，示例见B.2。

式中：

N—样品中菌落数；

∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；

n1—第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；

n2—第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；

d—稀释因子（第一稀释度）。

7.1.3    若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算，示例见B.3。

7.1.4    若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算，示例见B.4。

7.1.5    若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算，示例见B.5。

7.1.6    若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU~300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算，示例见B.6。

7.2    菌落总数的报告

7.2.1   菌落总数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

7.2.2    菌落总数大于或等于 100  CFU 时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

7.2.3    若空白对照上有菌落生长，则此次检验结果无效。

7.2.4    称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。